如何減少柱外體積

發(fā)表時間：2022-09-09 點擊次數(shù)：1084

如何使柱外體積達(dá)到最小？

第一，進(jìn)樣體積。要確保把進(jìn)樣體積控制在最小。

第二，樣品溶劑。盡量保持樣品的溶劑強(qiáng)度等于或小于初始流動相。如果必須使用*的有機(jī)溶劑作為樣品溶劑，那么要盡可能減少進(jìn)樣量。

第三，柱前管路。需要確保您使用的是最小內(nèi)徑的管路。請注意，在樣品流路中使用幾種不同內(nèi)徑的管路可能會導(dǎo)致額外的擴(kuò)散。對于梯度分離，通常可以忽略柱前管路對柱外體積的影響，但是，這個體積會對梯度延遲體積有影響。

第四，熱交換器體積。有些儀器有不同體積的熱交換器可供選擇。當(dāng)使用高柱溫時，這有助于使流動相與色譜柱之間的溫度相匹配。您需要使用與流速一致的最小體積的熱交換器，特別是對于2.1mm內(nèi)徑色譜柱。

第五，柱后管路。需要確保您使用的是最小內(nèi)徑的管路。請注意，在樣品流路中使用幾種不同內(nèi)徑的管路可能會導(dǎo)致額外的擴(kuò)散。對于20-50mm 2.1mm內(nèi)徑的色譜柱，75或100μm內(nèi)徑的管路可能會提供更好的結(jié)果，但是這會產(chǎn)生更高背壓。

第六，流通池體積。對于2.1mm和3mm內(nèi)徑的色譜柱，通常使用1-5μl的流通池。更大的流通池通常用于4.6mm內(nèi)徑更長的色譜柱。

常規(guī)HPLC儀器的優(yōu)化

如果您沒有UHPLC儀器，不用擔(dān)心。您可以通過以下幾個方面來優(yōu)化您的系統(tǒng)以獲得更高的性能。

當(dāng)在常規(guī)的HPLC儀器上使用高效的SPP色譜柱（如HALO）時，我們建議您按照以下幾個步驟進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化。先從簡單、便宜的優(yōu)化開始，然后根據(jù)需要再進(jìn)行更復(fù)雜和更昂貴的優(yōu)化。一旦您取得了可以接受的結(jié)果，您可以選擇放棄后續(xù)的優(yōu)化。

第一，減少檢測器的響應(yīng)時間，提高數(shù)據(jù)采集頻率。將檢測器響應(yīng)時間設(shè)置為小于0.1秒，并且數(shù)據(jù)采集頻率大于20Hz。

第二，將進(jìn)樣體積減少到最小，并確保能達(dá)到可接受的峰值響應(yīng)。

第三，確保樣品溶劑強(qiáng)度比流動相弱。如果這不能滿足，那么需要對您的進(jìn)樣體積有所限制。如果是梯度分離，那么您能夠注入比等度分離更多的樣品。然而，保持樣品溶劑強(qiáng)度小于初始流動相的強(qiáng)度仍然是重要的。

第四，使用體積更小，長度更短的管路。

第五，使用更小的流通池。

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如何減少柱外體積